Procedimiento de dosis fijas: ensayo de toxicidad aguda alternativo al LD50
Conoce el Procedimiento de Dosis Fijas (PDF): alternativa ética y fiable al LD50 para evaluar toxicidad aguda reduciendo número de animales y sufrimiento.
El procedimiento de dosis fijas (PDF) se propuso en 1984 para probar la toxicidad oral aguda de una sustancia utilizando menos animales y con menos sufrimiento que el antiguo ensayo LD50, desarrollado en 1927.
La FDP utiliza 10-20 animales para encontrar la dosis que produce signos de toxicidad pero no la muerte, y a partir de ahí predice la dosis letal. La LD 50("dosis letal al 50%") utiliza entre 60 y 80 animales para encontrar una dosis que mate al 50% de los animales en un tiempo determinado. A veces es necesario volver a realizar pruebas con dosis ligeramente superiores o inferiores.
Cómo funciona el procedimiento de dosis fijas
El objetivo del procedimiento de dosis fijas es identificar una dosis que cause signos claros de toxicidad proporcional pero no letal, en lugar de determinar una dosis letal precisa. En términos generales el método sigue estos pasos:
- Selección de una dosis inicial basada en datos previos (p. ej., estudios in vitro, datos de sustancias similares o información toxicológica disponible).
- Administración de la dosis a un pequeño grupo de animales y observación durante un periodo definido (habitualmente 14 días para toxicidad aguda).
- Si se observan signos de toxicidad moderada o severa, se considera que esa dosis está en la zona de interés y no se continúa subiendo la dosis; si no hay signos, se ensaya una dosis superior en un nuevo grupo.
- El procedimiento continúa de forma escalonada hasta acotar la dosis que produce toxicidad observable sin provocar la muerte, lo que permite estimar la peligrosidad de la sustancia y su posible clasificación.
Ventajas
- Reducción del número de animales: utiliza muchas menos animales que el ensayo LD50 clásico.
- Menor sufrimiento: el criterio principal son signos de toxicidad observables (p. ej., letargia, temblores, pérdida de apetito), con énfasis en puntos finales humanos y en evitar muertes innecesarias.
- Rapidez y eficiencia: permite una evaluación más rápida de la toxicidad aguda para fines regulatorios y de clasificación.
- Aplicabilidad regulatoria: fue adoptado y reconocido en directrices internacionales (por ejemplo, bajo la Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económicos, OECD, como una alternativa aceptada) y contribuye a la clasificación según sistemas como el GHS.
Limitaciones y precauciones
- No proporciona un valor LD50 exacto: el procedimiento estima la zona de toxicidad y permite clasificar la sustancia, pero no calcula una dosis letal media precisa.
- Menos adecuado para ciertos tipos de sustancias: sustancias que causan efectos retardados, irritación/corrosión local intensa o mecanismos toxicológicos atípicos pueden requerir métodos distintos o complementarios.
- Posible necesidad de pruebas adicionales: en algunos casos pueden requerirse ensayos complementarios para afinar la clasificación o estudiar efectos específicos (orgánicos, subagudos, etc.).
- Diseño experimental cuidadoso: la selección de la dosis inicial y la interpretación de signos clínicos requieren experiencia para evitar errores de clasificación.
Alternativas y contexto regulatorio
Además del procedimiento de dosis fijas existen otras metodologías desarrolladas para reducir el uso de animales y el sufrimiento, entre ellas:
- El método "up-and-down" (procedimiento secuencial), conocido como OECD TG 425.
- El método de clases agudas ("acute toxic class method"), OECD TG 423.
- Enfoques in vitro y de modelización que, combinados con datos existentes, pueden reducir aún más las pruebas in vivo cuando es apropiado.
Todos estos métodos forman parte de la estrategia 3R (Reemplazo, Reducción y Refinamiento) promovida internacionalmente para mejorar el bienestar animal en investigación toxicológica. La elección del método adecuado depende de los objetivos del estudio, el tipo de sustancia y los requisitos regulatorios aplicables.
Conclusión
El procedimiento de dosis fijas representó un avance importante frente al ensayo LD50 al permitir clasificar la toxicidad aguda con menos animales y menor sufrimiento. Aunque no sustituye por completo a otros ensayos cuando se requieren valores numéricos precisos o información específica, sigue siendo una herramienta valiosa y aceptada para la evaluación inicial de la toxicidad oral aguda.
Preguntas y respuestas
P: ¿Qué es el procedimiento de dosis fija (PDF)?
R: El procedimiento de dosis fija (PDF) es un método propuesto en 1984 que prueba la toxicidad oral aguda de una sustancia utilizando menos animales y con menos sufrimiento que la antigua prueba LD50.
P: ¿Qué era la prueba LD50?
R: La prueba LD50 es una prueba que se desarrolló en 1927 y utiliza entre 60 y 80 animales para encontrar una dosis que mate al 50% de los animales en un tiempo determinado.
P: ¿Cuántos animales utiliza el PDC?
R: El FDP utiliza entre 10 y 20 animales para hallar la dosis que produce signos de toxicidad pero no la muerte, y a partir de ahí predice la dosis letal.
P: ¿Cómo predice el PDC la dosis letal?
R: El PDF utiliza la dosis que produce signos de toxicidad pero no la muerte para predecir la dosis letal.
P: ¿Cuándo es necesario repetir las pruebas del PDC?
R: A veces es necesario repetir las pruebas con dosis ligeramente superiores o inferiores.
P: ¿Por qué se propuso el PDC?
R: El PDC se propuso para comprobar la toxicidad oral aguda de una sustancia utilizando menos animales y con menos sufrimiento que el antiguo ensayo LD50.
P: ¿Cómo reduce el PDC el sufrimiento de los animales?
R: El PDC reduce el sufrimiento animal utilizando menos animales y encontrando una dosis que produzca signos de toxicidad pero no la muerte.
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